數字PCR在HBV-DNA中的應用

Droplet數字PCR是一種新興的高靈敏度核酸定量方法，正越來越多地應用于臨床病毒學領域，包括乙型肝炎病毒(HBV)的檢測。在此，我們綜合報道了一種可靠的、重復性好的ddPCR方法，用于血清HBV-DNA的高靈敏定量。概率分析檢測限為4拷貝/ml(<1IU/ml)，線性關系良好(R2=0.94)，批內、批間重復性好，同一批和兩批獨立批之間的差值分別不超過0.14logCopies/mL和0.21logCopies/mL。通過分析慢性HBV感染患者(大多數正在接受抗病毒治療)的血清樣本，ddPCR成功地定量了89.8%的血清HBV-DNA<20IU/mL[相當于<112拷貝/ml]的血清HBV-DNA，中位數(IQR)為8(5-14)IU/mL[45(28-78)拷貝/ml]，在66.7%的血清HBV-DNA檢測不到的患者中，中位數(IQR)為5.01IU/mL(相當于<112copy/ml)，其中99.8%的患者血清HBV-DNA可檢測到<20IU/mL[相當于<112拷貝/ml]，中位數(IQR)為8(5-14)IU/mL[45(28-78)拷貝/ml]。同樣，通過分析血清學特征與隱匿性HBV感染相適應的患者(抗HBc+/HBsAg-)的血清樣本，ddPCR成功地定量了40%患者的血清HBV-DNA，中位數(IQR)為1(1-2)IU/mL[5(5-11)拷貝/ml]，這與隱匿性HBV感染中通常觀察到的極其有限的病毒復制一致。總體而言，血清HBV-DNA高靈敏定量檢測的可用性可以為優化隱匿性乙型肝炎感染的診斷、改善慢性HBV感染患者的治療管理提供附加值，也可以根據旨在實現HBV功能性治愈的創新藥物(即將投入臨床實踐)提供附加值。